人雌激素ELISA檢測試劑盒說明書

【資料簡介】

試驗原理：

Estrogen試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知Estrogen濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。人雌激素ELISA檢測試劑盒先將Estrogen和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Estrogen的濃度呈比例關系。

 

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項

1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5、 保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備

1． 標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，人雌激素ELISA檢測試劑盒加入終止液后應立即測定結果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于10%。

 

結 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的Estrogen標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的Estrogen含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

 

3、檢測值范圍：0-80ng/ml

 

4、敏感度： 0.1 ng/ml

Y148211 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Bio  生物素標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148212 Mouse Anti-human IgG（3D3）/AP  堿性磷酸酶（AP）標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148213 Mouse Anti-human IgG（3D3）/HRP  辣根過氧化物酶標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148214 Mouse Anti-human IgG（3D3）/PE-Cy7  PE-Cy7標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148215 Mouse Anti-human IgG（3D3）/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148216 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148217 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148218 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148219 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148220 Mouse Anti-human IgG（3D3）/APC  APC標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148221 Mouse Anti-human IgG（3D3）/PE-CY5  PE-CY5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148222 Mouse Anti-human IgG（3D3）/PE-Cy3  PE-Cy3標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148223 Mouse Anti-human IgG（3D3）/PE  PE標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148224 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Cy7  Cy7標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148225 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Cy5.5  Cy5.5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148226 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Cy5  Cy5標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148227 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Cy3  Cy3標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148228 Mouse Anti-human IgG（3D3）/Gold  膠體金標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.5ml
Y148229 Mouse Anti-human IgG（3D3）/FITC  FITC標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148230 Mouse Anti-human IgG（3D3）/RBITC  羅丹明標記的鼠抗人IgG單克隆抗體  0.1ml
Y148231 Donkey Anti-Guinea pig IgG/RBITC  羅丹明標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148232 Donkey Anti-Guinea pig IgG/FITC  FITC標記的驢抗豚鼠IgG  0.3ml
Y148233 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7  PE-Cy7標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148234 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148235 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148236 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148237 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148238 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148239 Donkey Anti-Guinea pig IgG/APC  APC標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148240 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-CY5  PE-CY5標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148241 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148242 Donkey Anti-Guinea pig IgG/PE  PE標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148243 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy7  Cy7人雌激素ELISA檢測試劑盒標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml
Y148244 Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的驢抗豚鼠IgG  0.1ml