產 品 名 稱 | 去基因組第1鏈cDNA合成預混體系Master Premix(For qPCR) RT EasyTM II(With gDNase) | ||
貨 號 | RT-01031 | RT-01032 | |
規 格 | 25 × 20 μL rxns | 100 × 20 μL rxns | |
價 格 | ￥427.00 | ￥1,284.00 | |
| 描 述 | 本產品是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。 5× gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中殘留的基因組，有效的避免了基因組對qPCR結果的干擾。 | ||
產品介紹
RT EasyTM II(With gDNase)是專門為Real Time PCR研制的快速去除基因組DNA污染的逆轉錄體系。5×gDNase Mix能在42°C，2min快速去除RNA中殘留的基因組，有效的避免了基因組對qPCR結果的干擾。
5× RO-EasyTM Mix內含福際專門研制的Foregene Reverse Transcriptase，是一款新型反轉錄酶，具有更強的RNA親和性。優化后的體系使得逆轉錄速率更快，42°C，15min即可完成第1鏈cDNA的合成。
該試劑盒的逆轉錄體系在50°C條件下逆轉錄酶也能保持良好的活性，因此對于復雜的RNA模板更優勢，能輕松的轉錄GC含量高、二級結構復雜的RNA模板。
試劑盒應用
v 直接用于RealTime PCR定量分析基因的表達。
v 可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA進行分析。
v 高GC含量或具有復雜二級結構RNA模板的逆轉錄。
儲存條件
試劑盒保存于-20℃。產品收到后立即存放于-20℃恒溫冰箱中。如果存儲條件適當，產品在1年有效期內不會降低任何性能。
劑盒內容
5× gDNase Mix：gDNA去除劑，在進行RT反應前務必按照操作說明使用該試劑(內部甘油含量較高，-20℃以上可能不會結冰，屬于正常現象)。
5× RO-EasyTM Mix：包含福際生物專門研制的Foregene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、穩定劑、增強劑、優化劑及優化配比的逆轉錄引物(Random Primer、Oligo(dT)18 Primer)。
Foregene Reverse Transcriptase
Foregene逆轉錄酶能夠提供高效、特異性強的逆轉錄反應。逆轉錄酶表現出很高的親和力，并在 50°C反應溫度條件下仍然保持良好的逆轉錄活性，能夠很好的逆轉錄其他逆轉錄酶不能處理的二級結構復雜的RNA。Foregene Reverse Transcriptase 靈敏度高，使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg) 。
RT Mix耐受性
經測試分析，2× RT OR-EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出很高的耐受性。實驗室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留，對逆轉錄有很強的抑制性，導致逆轉錄效果不理想或逆轉錄效率低。Foregene RT Easy系列產品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉錄更容易、高效率的進行。
酒精耐受性分析
胍鹽耐受性分析
RNA模板濃度
(0.1pg-1μg total RNAor 0.01pg-0.1μg mRNA) /20 μL體系。
非特異性擴增
Answer
1. 引物設計不合理
建議：按照引物設計原則進行引物的設計。
2. 基因組殘留。
建議：確定第1步gDNA去除反應溫度為42°C，也可延長反應時間至5min。
RT-QPCR無擴增信號
Answer
1. RNA被降解。
建議：提取RNA的材料盡量新鮮，應用高質量高純的的RNA。
2. RNA含有抑制劑。
建議：逆轉錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等，建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進行清洗，除去抑制劑。
3. 引物設計問題。
建議：按照引物設計原則，重新設計引物進行檢查。
空白對照出現目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將DNA樣品吸入加樣槍內或濺出離心管外。
2. PCR反應體系制備時發生污染。
建議：操作時進行必要的防護措施，比如：戴乳膠手套，使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。
3. 引物出現降解。
建議：使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發生降解，更換新的引物進行熒光檢測實驗。
